2022年02期

1株假单胞菌oprD基因缺失和回补载体的构建

作  者 朱艳容,刘志新,杨靖,韩韵,陈果,徐祥
第一作者 朱艳容
作者单位 湖北医药学院基础医学院,湖北十堰
卷  号 50
发表年份 2022
发表刊期 2
发表页面 109-111,117
关  键  字 假单胞菌;毒力因子;基因敲除;基因回补
摘  要 [目的]构建假单胞菌毒性基因(oprD)缺失突变株,为进一步探讨其编码的毒力因子功能奠定基础。[方法]利用pEX18Gm质粒作为基因敲除的载体,构建假单胞菌oprD 基因重组自杀质粒,通过同源重组并激活自杀基因方式,筛选到目的基因缺失的突变株,再利用pBBR1MCS-2质粒作为目的基因回补的载体,构建回补载体。[结果]同源重组后,经过庆大霉素和氯霉素双抗平板、蔗糖平板筛选和PCR鉴定,成功获得了oprD基因缺失突变株,类似操作获得了回补菌株。[结论]基因缺失突变株的成功构建可为下一步的毒性机理研究奠定基础。
附  件 1株假单胞菌oprD基因缺失和回补载体的构建
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